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HBVDNA与其病毒免疫标志物的关系

更新时间:2009-12-27:  来源:毕业论文
HBVDNA与其病毒免疫标志物的关系
【摘要】 目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBVDNA与病毒免疫标志物的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(FQPCR)对568份HBV感染者血清中HBVDNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果:HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组HBVDNA阳性率约为98.9%;HBsAg、HBcAb和HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为65.4%;HBsAb、HBcAb和HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为13.9%;三组间HBVDNA阳性率有明显差异(P<0.01)。HBeAg阳性标本中HBVDNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBVDNA的符合率最高,为77.6%。结论:检测HBVDNA含量结合血清病毒标志物对乙型肝炎的临床诊断治疗以及病情判断有重要意义。
【关键词】 乙型肝炎病毒;HBVDNA;实时荧光定量PCR;病毒标志物
Relationship between HBVDNA and HBV Immunological Markers in Patients Infected HBV
Abstract:Objective To investigate the relationship between HBVDNA and HBV Immunological Markers in patients who infected HBV.Methods FQPCR was used to detect the contents of serum HBVDNA in 568 patients infected HBV and ELISA was used to detect the serum HBV Immunological Markers.Results The positive rate of HBVDNA in HBsAg,HBeAg and HBcAb positive samples was 98.9%.In HBsAg,HBcAb and HBeAb positive samples it was 65.4% and in HBcAb,HBeAb and HBsAb positive samples it was 13.9%.There was significant difference among the three groups(P<0.01).The positive rate of HBVDNA in HBeAg positive samples and the coincidence of HBVDNA and HBsAg was the highest,it was 92.0% and 77.6% respectively.Conclusion It was very important to detect the contents of serum HBVDNA and the Immunological Markers for the clinic diagnosis and therapy and the judgement of pathogenetic condition in patients with chronic hepatitis type B.
Key words:Hepatitis B virus;HBVDNA;Fluorescent quantitation polymerase chain reaction;HBV Immunological Markers
血清中HBVDNA是HBV复制的直接依据,为临床上判断HBV复制的最特异也最直观的指标。HBVDNA的出现早于其他血清学指标,定量聚合酶链反应是其最敏感和准确的技术之一。ELISA方法是检验乙型肝炎病毒标志物的常用方法,为研究HBVDNA与病毒标志物的关系及其临床意义,我们采用上述两种方法对568 HBV感染者进行了测定,报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 568例为2001年3月至2006年1月在我院就诊的门诊、住院乙型肝炎患者。其中男342例,女226例;年龄2岁~78岁,平均(46.5±5.2)岁,其中急性肝炎(AH)128例,慢性肝炎(CH)253例,活动性肝炎肝硬化(LC)187例。临床诊断均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议诊断标准[1]。
1.2 监测方法
1.2.1 乙型肝炎病毒标志物 检测试剂盒由上海科华生物工程有限公司提供,使用美国BOIRAD洗板机及酶标仪。
1.2.2 HBVDNA定量测定技术 检测试剂盒由厦门安普利生物工程有限公司提供,使用美国AMI公司生物P
E 2400扩增仪。
1.3 操作方法 操作方法及结果判断严格按照说明书进行。
1.4 统计学方法 数据的统计处理由SPSS 12.0 for Windows统计软件完成,采用卡方检验。
2 结果
2.1 在各种血清学模式中,HBsAg、HBeAg及HBcAb三项阳性患者的HBVDNA阳性率最高,达98.9%;其次为HBsAg及HBeAg二项阳性患者,为86.2%。HBeAb及HBcAb二项阳性患者阳性率最低,为12.9%。详细情况见表1。
2.2 对各种病毒标志物来说,HBeAg阳性者的HBVDNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBVDNA诊断符合率最高,达77.6%。详细情况见表2。
表1 不同血清学模式HBVDNA检测结果略
表2 不同病毒标志物HBVDNA检测结果(略)
3 讨论
ELISA方法实际检测的是人体对HBV的免疫反应状态。由于HBV的表达和机体免疫反应的强弱受多种因素的影响,因此反映患者体内病毒复制情况时有一定局限性。荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)是在90年代末期发展起来的一项全新技术,是检测乙型肝炎病毒自身,可以准确地反映患者体内病毒的复制程度和传染性的强弱。该方法避免了PCR平台效应的干扰,实行闭管检测,避免了气溶胶的污染,具有高灵敏性、高特异性和高精确性的特点,目前已成为反映外周血中病毒复制最直接可靠的指标。
3.1 不同血清学模式与HBVDNA 从表1可以看出,在不同的血清学模式中,HBsAg(+)、HBeAg(+)及HBcAb(+)组合的HBVDNA检出率最高为98.9%。该组患者病毒复制非常活跃,说明它们之间有较好的符合率,在无条件检测HBVDNA的情况下,用这三个标志物阳性的结果,可以作为间接判断乙型肝炎病毒存在的依据。HBsAg(+),HBeAb(+)及HBcAb(+)和HBsAg(+)及HBcAb(+)这两组合的HBV检出率分别为65.4%和41.0%,说明乙型肝炎病毒复制仍较为活跃。在HBeAg(+)向HBeAg(-)转换过程中,前C基因第1 896位鸟苷被腺苷代替而形成终止密码(TAG)或启动子(BCP)1 762/1 764基因发生突变[2~4],可以阻止前C基因继续翻译,而妨碍HBeAg的表达,血清表达为HBeAg(-)/HBeAb(-)或HBeAg(-)/HBeAb(+),但病毒复制仍然存在,这不影响HBV的复制和传播。传统观点认为HBsAb、HBeAb和HBcAb阳性出现为感染恢复期,基本无传染性,我们将这三组抗体阳性的标本用PCR检测其HBVDNA时,结果13.9%阳性,说明这些抗体阳性的病例中仍存在着乙型肝炎病毒低水平复制和弱传染性,修正了过去认为抗体出现即意味着不再有病毒复制和传染性看法。HBeAb(+)及HBcAb(+)组合的HBVDNA的检出率最低,为12.9%,HBV感染后HBcAb常有较高的浓度并持续较长的时间,血清中检出HBcAb表示过去和现在发生HBV感染。HBVDNA的检测可为区别两者提供依据。
3.2 单个免疫标志物与HBVDNA HBsAg作为血清学诊断急、慢性乙型肝炎的主要标志物,HBVDNA阳性检出率高达78.7%,它与HBVDNA诊断符合率最高(77.6%),这是临床上将其做为初筛指标的原因。但仍存在漏诊现象,尚有27.2%HBsAg阴性标本为HBVDNA阳性(表2)。说明这些患者中,有些不仅是HBV的感染者,而且还可能有病毒复制和传染性。出现以上情况的可能原因,一是标本中病毒颗粒少;二是ELISA法受其自身敏感性和特异性的限制;三是HBV S基因区出现位点突变导致HBsAg表达缺陷[5]。这也进一步表明对一些低水平复制的病例,如慢性肝炎和隐性感染者或携带者的诊断和传染性的判断上,只有用PCR技术检测才可靠。HBeAg阳性组的HBVDNA水平显著高于其阴性组,证实了HBeAg是病毒在体内高度复制的指标之一。从表2可看出,不但HBeAg阳性病例存有病毒复制,而且大多数HBeAg阴性患者中病毒复制仍很活跃,其HBVDNA阳性率达49.7%。这一现象产生的原因可能是由于HBV前C区变异而不能产生HBeAg所致,而这种变异更多的发生在乙型肝炎活动期及HBeAg/HBeAb转换期,因此若患者的血清中未检测出HBeAg但HBVDNA水平较高时,应引起临床的高度重视,密切随访。综上所述,单靠血清乙型肝炎病毒标志物的检测结果来进行诊断和判断病情是不够的,应结合HBVDNA的检测和临床来进行综合分析,才能准确反映患者体内HBV复制的真实情况。可以看出,应用实时定量PCR系统检测HBVDNA,结合抗原抗体综合测定对判断乙型肝炎感染者的病情,监测病毒感染及其在体内的复制活跃程度具有重要意义,可以为临床诊断选择更合理的治疗方案提供可靠依据。
【参考文献】
[1] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会.肝病学分会联合修订.病毒性肝炎防治方案[J].中华传染病杂志,2001,19(1):5662.
[2] Gunther S,Piwon N,Will H.Wildtype levels of pregenomic RNA and replication but reduced prec RNA and eantigen of hepatitis B virus with A(1 762)→Gand G(1 764)→A mutations in the core promoter[J].J Gen Virol,1998,79(2):375380.
[3] 周岳进,肖扬,王开鉴.微流芯片检测HBV前C区nt1896/BCP区nt1762基因突变的临床意义[J].实用肝脏病杂志,2005,8(5):276277.
[4] Chan HLY,Hussain M,Lok ASF.Different hepatitisB Virus genotypes are associated with different mutation in the core promoter and precore regions during hepatitis B e antigen seroconverion[J].Hepatology,1999,29(8):976984.
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