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超声波提取紫露草总黄酮及其鉴别

更新时间:2014-7-22:  来源:毕业论文

超声波提取紫露草总黄酮及其鉴别
摘要:目的 为充分利用紫露草植物资源,避免资源的浪费,探讨紫露草总黄酮的提取及鉴别方法。方法 采用超声波乙醇浸提法从紫露草中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量。结果 测得样品中总黄酮的含量C=0.1562mg/ml,回收率为97.4%,其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取紫露草黄酮类物质的有效途径。
论文关键词:超声波提取,紫露草,总黄酮,鉴别
  *通讯作者:黄锁义,教授,硕士研究生导师.
  紫露草(Tradescantiareflexa)别名紫花鸭草,为鸭跖草科多年生宿根草本,原产于北美,我国引种栽培。紫露草茎通常簇生,紫露草性喜凉爽,湿润气候,耐寒性较强,适应性广,耐旱、耐贫瘠、耐盐碱,几乎没有病虫害。最常见的是适应性非常强的开蓝紫色花的品种。我国各地均有栽培。紫露草性味淡、甘、凉,可以活血、利水、消肿、散结、解毒。能治疗痈疽肿毒、结核、淋病等疾病。
  近年来,超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道,表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取紫露草叶中黄酮类物质的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取紫露草总黄酮及鉴别。
  1仪器与试剂
  1.1仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(超声工作频率40KHz,昆山市超声仪器有限公司);UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。
  1.2试剂95%乙醇AR;亚硝酸钠AR;硝酸铝AR;氢氧化钠AR;三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;冰醋酸AR;乙酸乙酯AR;芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);新鲜紫露草采自右江民族医学院校园内。
  2方法与结果
  2.1总黄酮成分提取取新鲜紫露草,烘干,粉碎。称取紫露草粉末6g,加80ml95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤。滤渣再加80ml95%乙醇,超声波提取2.5h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩5~7ml为止,放置100ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。
  2.2测定方法依据以芦丁为对照品测定木瓜叶中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
  2.3定量实验—总黄酮的含量测定
  2.3.1波长的选择取样品液适量,在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420~700nm波长范围测定螯合物的吸光度,螯合物于510nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。
  2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液(0.10mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10.00ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加10%硝酸铝溶液0.30ml,摇匀,静置6min;再加4%氢氧化钠溶液4.00ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12min,以试剂作空白,于510nm处测定吸光度,见表1
  表1紫外可见分光光度计测定吸光度
  C(mg/ml)0.00 0.005 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
 
吸光度 0.000 0.060 0.122 0.250 0.365 0.485 0.603
 

  根据上表得回归方程:A=-2.9069×10+12.05C,r=0.9999。
  2.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml,置10.00ml容量瓶,按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.097,根据回归方程:A=-2.9069×10+12.05C,计算样品中总黄酮的含量C=0.1562mg/ml。
  2.3.4回收实验精密量取样品液1.00ml,加入标准芦丁对照品1.00ml(0.10mg/ml),同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为97.4%。
  2.4定性实验—总黄酮的鉴别
  2.4.1颜色反应紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
  浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5min,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点。
  三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。
  乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点。
  盐酸-镁粉反应:取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色。
  2.4.2纸层析取样品溶液10l点在滤纸上。用正丁醇:醋酸:水=4:1:5(体积比)为展开剂,上行展开5h,取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。
  3讨论
  3.1实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为97.4%,利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的应用前景。
3.2黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
  黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。紫露草分布广泛,本文实验结果表明,紫露草中含有较为丰富的黄酮。因此,紫露草具有广泛开发和利用价值,值得综合利用,加强资源开发。
参考文献
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