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葛粉中葛根素的高效液相色谱分析

更新时间:2014-9-13:  来源:毕业论文
葛粉中葛根素的高效液相色谱分析
 提要:目的:测定葛粉中葛根素的含量。方法:用HPLC法测定,以MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)为流动相,250nm为检测波长。结果:葛根素呈良好的线性关系,平均回收率为98.6%, RSD为1.76%。结论:该法简单、快速、准确。
  关键词:葛粉;葛根素;HPLC   
   Abstract:Object:Determination of Pueraria in Pueraria Powder Methods: Puerariawere determined by HPLC.The mobile phase was MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5).Detection wavelength was at 250nm.Results: Pueraria showed a good linear relationship.The average recovery was 98.6% and RSD was 1.76%.Conclusion:This method was simple,quick and accurate.
   Key words: Pueraria Powder ; Pueraria ;HPLC
  
  葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中药材,具有解肌退热,生津,透疹,升阳止泻功效,用于外感发热头痛、项背强痛,口渴,消渴,麻疹不透,热痢,泄泻,高血压颈项强痛等[1]。现代研究证实,葛根中的主要有效成分为葛根素等异黄酮类化合物,具有抗炎解热、扩张冠状动脉血管、增加冠状动脉血流量的作用,同时也有降低血压的作用。有关葛根中葛根素等异黄酮的含量测定研究已有不少报道[2-5],但对葛粉中葛根素含量测定报道不多。本文对葛粉中葛根素的提取条件和测试条件等进行比较研究,并采用高效液相色谱法对葛粉样品进行了定量分析, 结果令人满意。
   1 实验部分
   1.1 仪器与试剂
  岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪;SPD-10 Avp紫外检测器;岛津UV-265紫外分光光度仪,多功能榨汁机/搅拌机SG300-I(上海科骏电器有限公司)。甲醇(色谱纯),水(二次蒸馏),其余均为分析纯。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所);鲜葛(浙江省永嘉县潘坑乡)。
   1.2 色谱条件
  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;色谱柱C18 diamonsil5ul(150×4.6mm I.D),MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)为流动相,紫外检测波长250nm。
   2 结果与讨论
   2.1 提取溶剂浓度的选择
  精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml,超声提取60分钟,进样5ul,比较峰面积,实验结果表明30%乙醇提取最好。
   2.2 超声提取时间的选择
  精密称取同一样品约0.1g,分别加30%乙醇10ml,超声提取30分钟、45分钟、60分钟,进样5ul,比较峰面积,实验结果表明超声60分钟为最佳提取条件。
   2.3 流动相及流速的选择
   试验时曾采用下述流动相进行测定:甲醇-水(25:75)、甲醇-水-醋酸(30:70:0.5)、甲醇-水(30:70)为流动相,结果采用甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5)为流动相,样品分离好。而流速也以1.0ml/min为合适。
   2.4 标样溶液的制备
  称取一定量葛根素对照品,用30%乙醇溶解配制成浓度为13ug/ml的葛根素标准液。
   2.5 葛粉制备
  取鲜葛用水洗净切片,称取20g放入搅拌机内,搅拌三次,每次1分钟,每次加水200ml, 150ml,100ml,合并浆汁放置二天,去掉上面的水,下面的粉浆用定量滤纸过滤,低温干燥,放入干燥器中备用。
   2.6 供试品溶液制备
  精确称取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超声提取1h,滤纸过滤,滤液过0.45um滤膜作为供试品溶液。
   2.7 线性关系考察
   在上述色谱条件下,分别进标样溶液0.5、3、5、7、10μl,测得各峰面积。以葛根素为横座标(A),以峰面积(Y)为纵座标,计算得回归方程:Y=3.90×106x+728.14,相关系数r=0.9999;结果紫外检测葛根素在0.0065-0.13μg范围内呈良好线性关系。
   2.8 精密度试验
  取上述标样溶液,连续进样5次,测定,RSD为1.11%。
   2.9 重复性试验
  取同一样品重复测定5次,RSD为1.61%。
   2.10 稳定性试验
  取上述供试品溶液,0、2、5、7、10h进样,RSD为2.1%,10小时内进样稳定。
   2.11 回收率试验
   取已知含量的样品,分别加入葛根素标样,按上述方法测定5次,平均回收率为98.6%, RSD为1.76%。见表1。
   2.12 样品分析
  精密吸取标样溶液5μl与供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,测定,结果:葛粉中葛根素的含量为0.06%(n=3),见下图。 http://www.lwfree.cn
  
  
   3 讨论
  本文采用高效液相色谱法测定葛粉中葛根素的含量,方法简单、快速、准确,结果满意,可用于葛粉中葛根素的含量测定。
  
   [参考文献]
   [1] 中国药典2005版一部.2005: 233-234.
   [2]章育中,杨凡。高效液相色谱法测定葛根及其片剂中异黄酮的含量.药物分析杂志,1984,4(2):67.
   [3]张蕾, 潘扬,朱蓉贞,等。不同品种及产地的葛根中葛根素含量的比较。中国中药杂志,1995,20(7):399.
   [4]肖学凤, 高岚。HPLC 法测定不同产地葛根中葛根素的含量。中草药,2001,32(3):220.
   [5]迟霁菲,张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量.中南药学2006,l14(14):307-308
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