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UPLC-MS群体感应自杀种群中的信号分子AHL的检测

时间:2018-01-11 11:16来源:毕业论文
用UPLC-MS方法实时监测群体感应自杀回路控制下的野生种群产生AHL的情况,并确定突变种群是否产生AHL。实验方法主要使用WATERS液相色谱质谱联用仪(UPLC-MS)检测经过前处理的细菌培养液
摘要:群体感应是细菌生长到一定密度时相互感应,并进行基因表达及调控产生的独特的群体行为现象。N-酰基高丝氨酸内酯(AHL)类化合物是革兰阴性菌群体感应中最重要的一类信号分子,调控许多生理特性基因的表达。快速、简便、有效地检测细菌能否产生AHL或产生何种信号分子,成为深入研究和了解细菌群体感应的重要手段。本毕业论文试图用UPLC-MS方法实时监测群体感应自杀回路控制下的野生种群产生AHL的情况,并确定突变种群是否产生AHL。实验方法主要使用WATERS液相色谱质谱联用仪(UPLC-MS)检测经过前处理的细菌培养液,通过色谱图及质谱图相结合来检测信号分子。同时,本实验也对生物传感器法检测进行了初步的摸索。17425
关键词: 细菌自杀;信号分子;3-oxo-C6-HSL;液相色谱串联质谱仪
Detection of the Acylhomoserine Lactone Inducer of Quorum sensing signal molecules in the suicide population
Abstract: Quorum sensing is the unique,perse group behavior phenomenon occurred when the bacterium grows to a certain density and responses mutually,and it is responsible for the gene expression and the regulation. Many gram-negative bacteria are known to use acylhomoserine lactones (acyl-HSLs) as intercellular signals, called autoinducers, in density dependent gene expression ,autoinducers at high cell densities can achieve critical concentration and activate the expression of specific genes. Rapid, simple and efficient detection of bacteria wether can produce signal molecules AHL or other kinds of signal molecules, become important means of in-depth study and understand of bacterium quorum sensing. UPLC-MS method used in this paper attempted to monitor the the AHL produced by wild populations of quorum-sensing circuit under the control of suicide, and determined wether the mutant produce AHL.A method based on the high performance liquid chromatography-mass spectrometry technigue for determination of quorum sensing singal molecules AHL was developed. At the same time, experiments on biosensor detection by a preliminary trial. 源自六/维-论;文;网!加7位QQ324,9114 www.lwfree.cn
Key Words: Quorum sensing; signal molecules; 3-oxo-C6-HSL; UPLC-MS
目   录
1    前言    1
1.1    信号分子在细菌的群体感应的作用    1
1.2    信号分子的感应机制    1
1.3    信号分子的结构特点    3
1.4    群体感应系统信号分子的检测方法    3
1.5    本研究主要内容及研究意义    6
2    材料与方法    7
2.1    材料与仪器设备    5
2.1.1    菌种    7
2.1.2    实验材料    7
2.1.3    主要仪器和设备    8
2.1.4    培养基和试剂的制备    9
2.2    实验方法    10
2.2.1    色谱条件的优化    10
2.2.2    色谱与质谱条件    10
2.2.3    液相色谱质朴联用仪法(UPLC-MS)检测样品中的信号分子标品    11
2.2.4    细菌培养    11
2.2.5    样品前处理    11
2.2.6    扩大培养    12
2.2.7    构建生物传感器    12
2.2.8    生物传感器法检测样品中的信号分子    13
3    结果与分析    15
3.1    UPLC—MS法检测信号分子标品    15
3.2    UPLC—MS法检测不同菌株培养上清液中的信号分子    17 UPLC-MS群体感应自杀种群中的信号分子AHL的检测:http://www.lwfree.cn/shengwu/20180111/19085.html
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