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拟南芥Des1基因的克隆与酵母双杂载体构建(3)

时间:2018-08-10 09:16来源:毕业论文
2、吸上清并分相:取上清液,转移至洁净的1.5 mL EP管中,向上清液中加入200 L的氯仿,剧烈振荡混匀15 s,室温放置5 min。待溶液分层后,4 C,12000 rpm离心


2、吸上清并分相:取上清液,转移至洁净的1.5 mL EP管中,向上清液中加入200 µL的氯仿,剧烈振荡混匀15 s,室温放置5 min。待溶液分层后,4 °C,12000 rpm离心10 min。
3、吸上清并沉淀:取出上层水相(约0.6 mL)至洁净的1.5 mL EP管,加入等体积异丙醇,颠倒混匀。4 °C,12000 rpm离心10 min(可先在-20 °C放置5-10 min帮助沉淀)。
4、洗涤RNA:弃上清液(注意不要倒出沉淀),加1 mL 75 %乙醇洗涤沉淀,4 °C,12000 rpm离心10 min。
5、除尽洗液:弃上清液(尽量倒尽),short 10000 rpm离心10 s,用移液枪把管底75 %乙醇吸干。
6、溶解并测浓度:在超净工作台上将EP管吹干,约5 min。随后,用20 μL DEPC水溶解沉淀。NanoDrop 2000测浓度。
1.2.2  PCR引物设计
PCR引物通过Primer Premier 5.0软件辅助设计。根据载体pGBKT7的质粒图谱,在引物两端分别加上合适的酶切位点和保护碱基 拟南芥Des1基因的克隆与酵母双杂载体构建(3):http://www.lwfree.cn/shengwu/20180810/21098.html
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