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高羊茅再生体系的建立(2)

时间:2019-07-30 12:40来源:毕业论文
从 20 世纪 90 年代开始,高羊茅组织培养方面的研究得到很大发展,所使用的外植体材料涉及到未成熟的胚、幼穗和下胚轴等[4-6]。但是,与成熟的种子作


从 20 世纪 90 年代开始,高羊茅组织培养方面的研究得到很大发展,所使用的外植体材料涉及到未成熟的胚、幼穗和下胚轴等[4-6]。但是,与成熟的种子作为外植体相比,存在成本高且受季节限制等缺点。而以高羊茅成熟种子作为外植体,材料易保存并且一年四季都可以使用。所以本课题的目的在于构建高效稳定的再生体系,探究不同处理对再生过程的影响,为高羊茅的遗传转化提供基础。
1 材料与方法
1.1 实验材料
本试验于 2015 年 1 月份到 5 月份进行。以高羊茅的 11 个品种“金刚钻”、“可奇思”、“星火”、“大联盟”、“猎狗 5 号”、“太阳神”、“要塞”、“佛浪”、“雅典娜”、“黄金岛”、“瑞星”的成熟种子作为外植体。
1.2 培养基
1.2.1 基本培养基
基本培养基为 MS 培养基,其中添加 3 % 的蔗糖,0.6 % 的琼脂。pH 值调为 5.8 ,于 121 ℃ 下高压蒸汽灭菌 15 分钟。
1.2.2 诱导培养基
在 MS 基本培养基中分别添加 2.5 mg/L 和 7.5 mg/L 的 2,4-D 作为诱导培养基。pH 值调为 5.8 ,于 121 ℃ 下高压灭菌蒸汽灭菌 15 分钟。
1.3 设备和仪器
主要设备:磁力搅拌器、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、电子天平、恒温培养箱、pH 计等。
主要仪器:量筒、酒精灯、培养皿、三角瓶、烧杯、竹签、镊子、刀子、纱布等。
1.4 试验方法
1.4.1 材料脱皮
采用另作改进 Yue Q 等人[7]所使用的方法,对作为外植体的高羊茅成熟种子进行脱皮。取一定量成熟的高羊茅种子, 放在 50 % 的硫酸溶液中,用磁力搅拌器匀速搅拌 20 分钟,进行脱皮处理后用自来水冲洗适当时间除去硫酸。
源`自^六;维'论.文;网www.lwfree.cn

1.4.2 材料消毒
采用另作改进的 Yue Q 等人[7]所使用的方法,对作为外植体的高羊茅成熟种子进行消毒。将经过脱皮处理的高羊茅成熟种子,放入安替福民溶液(活性为 10 %)中,磁力搅拌消毒 15 分钟,倒去安替福民溶液。再在超净工作台上用 75 % 无水乙醇处理 1 分钟,无菌水冲洗 6 至 8 次后备用。 高羊茅再生体系的建立(2):http://www.lwfree.cn/shengwu/20190730/36447.html
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