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微管与H2O2在ALA对ABA诱导气孔关闭的抑制作用中的互作(2)

时间:2019-08-04 15:31来源:毕业论文
为此,本文用生长 2 周的野生型拟南芥(WT)及 GFP:ɑ-tubulin-6 转基因型幼苗子叶,进行了大量对比试验,研究了微管与 H2O2在 ALA 对 ABA 诱导气孔关闭的抑


为此,本文用生长 2 周的野生型拟南芥(WT)及 GFP:ɑ-tubulin-6 转基因型幼苗子叶,进行了大量对比试验,研究了微管与 H2O2在 ALA 对 ABA 诱导气孔关闭的抑制作用中的互作。由结果知,ALA 抑制 ABA 诱导气孔关闭的作用与其消耗 H2O2有关,而 H2O2含量的下降又可促使微管的聚合,从而抑制了气孔的关闭。本研究揭示了 ALA调控气孔运动的新机制。1 材料与方法1.1 试验材料生长 2 周的拟南芥野生型(WT,生态型Columbia)及 GFP:ɑ-tubulin-6 转基因型拟南芥幼苗的子叶。1.2 材料的培养1.2.1 MS固体培养基的配置MS 培养基(不含琼脂和蔗糖)配方:KNO3:1900 mg/L、NH4NO3:1650 mg/L、KH2PO4:170 mg/L、MgSO4:370 mg/L、CaCl2:440 mg/L、KI:0.83 mg/L、H3BO3:6.2 mg/L、MnSO4:22.3 mg/L、ZnSO4:8.6 mg/L、Na2MoO4:0.25 mg/L、CuSO4:0.025mg/L、 CoCl2: 0.025 mg/L、 Na2EDTA: 37.3 mg/L、 FeSO4: 27.8 mg/L、 C6H12O6: 100 mg/L、C2H5NO2:2 mg/L、C12H17N4OS+:0.1 mg/L、C8H10NO5P:0.5 mg/L、HNO3:0.5 mg/L与 8 g/L 琼脂和 30 g/L 蔗糖,蒸馏水中溶解,用 NaOH 调节 PH值,并用 PH试纸测量,直至其达到至 5.8-6 之间,置于灭菌锅中灭菌 20 min,温度设定为 121℃,最后铺板于无菌玻璃培养皿,待用。
1.2.2 种子灭菌将种子放于 4℃ 冰箱春化 3-4 天,然后用 75% 乙醇上下颠倒洗涤45 s,去除乙醇,并用无菌水洗涤 3 次,再用 10% NaClO 上下颠倒洗涤十分钟,去除 NaClO,无菌水洗濯 5 次,随后播种于培养基中温室培养。
1.2.3 MES-KCl缓冲溶液配制在 10 mmol/L 的 MES (2-N-吗啡啉-乙磺酸) 中加入 50 mmol/L KCl 再加 0.1 mmol/L的 CaCl2,并用 Tris 调节 PH值至 6.15。1.2.4 负载溶液配制将 10 mmol/L Tris 与 50 mmol/L KCl 溶液混合。若配 1 L 溶液需要 Tris:1.2114 g,KCl:3.725 g;若配 500 mL 溶液需要 Tris:0.6057g,KCl:1.8625 g。用浓 HCl调节 PH至 7.2。 微管与H2O2在ALA对ABA诱导气孔关闭的抑制作用中的互作(2):http://www.lwfree.cn/shengwu/20190804/36925.html
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