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血液RNA提取条件的优化

时间:2017-12-04 20:39来源:毕业论文
论文共采用4种方法提取RNA:方法1.全血直接抽提总RNA,即用Trizol LS处理全血样本提取总RNA;方法2.在方法1的基础上用DNA酶处理,并结合Tiangen公司RNA纯化试剂盒进一步纯化RNA
摘要:本毕业论文分别以新鲜小鼠血液样本和冻存的人血液样本为研究对象,运用多种方法提取RNA,对RNA的提取、分离、纯化进行了系统的研究。本次毕业论文共采用4种方法提取RNA:方法1.全血直接抽提总RNA,即用Trizol LS处理全血样本提取总RNA;方法2.在方法1的基础上用DNA酶处理,并结合Tiangen公司RNA纯化试剂盒进一步纯化RNA;方法3.红细胞裂解后富集白细胞,再用Trizol试剂从白细胞中提取总RNA;方法4.Tiangen公司RNAprep pure血液总RNA提取试剂盒提取总RNA。实验对象也来自不同物种,加强了论文的结果的可靠性。实验过程中首先提取纯化RNA,并分别通过紫外分光光度计检测、凝胶电泳、RT-PCR、real-time PCR等方法对纯化得到的RNA的质量进行检测,最后得出最优的提取方法——方法2。16144
关键词:TRIZOL试剂;RNA酶活性;RT-PCR检测;定量分析;逆转录
 Optimization of Blood RNA’s Extraction Condition
Abstract:This paper studies fresh mice blood samples and free-stored people blood samples, use serial methods to extract RNA, and carry on a systematic research on RNA’s extraction, separation and purification. This paper uses four different methods to extract RNA: 1.Using the whole blood extract total DNA directly, that is using Trizol LS reagent process all the blood samples to extract total DNA; 2.On the basis of method 1, use DNA enzymes and RNA purification kits from Tiangen company to further purify RNA; 3.Red blood cells cracking enrichment of white blood cells, and then extract total RNA from white blood cells; 4.Extract total RNA with RNAprep pure blood kits from Tiangen company. In addition, the research object also come from different species. All these have strengthened the reliability of the result. In experiment, we first extracted and purified RNA, and then we use ultraviolet spectrophotometry, gel electrophoresis, RT-PCR, and real-time PCR methods to test the quality of RNA. Finally, we found out the best extraction method—method 2.
源自六;维,论/文.网*加7位QQ324`9114 www.lwfree.cn

Keywords: Enzyme Activity; RT-PCR Detection; Quantitative analysis; Retrovirus
 目录
1 研究背景    1
1.1 背景介绍    1
1.2 RNA提取技术的意义    1
1.3 RNA提取方法    2
1.3.2 TRIZOL试剂提取法    2
1.3.3 SDS-Phenol法    2
1.3.4 CTAB法    2
1.3.5 热硼酸法及改良热硼酸法    2
1.4 RNA提取后浓度、纯度和完整性分析    3
1.5 RNA提取过程中的常见问题和解决方法    3
1.5.1 内源性RNase的污染    3
1.5.2 外源性RNase的污染    4
1.5.2.1 实验器材的污染    4
1.5.2.2 实验人员的污染    4
1.5.2.3 实验试剂的污染    4
1.6 RNA提取技术的发展前景    4
2 实验原理和流程    5
2.1 实验原理    5
2.1.1 细胞总RNA提取原理    6
2.1.2 逆转录-聚合酶链反应原理    7
2.1.3 紫外分光光度计检测RNA纯度原理    7
2.1.4 琼脂糖凝胶电泳原理    8
2.2 实验方案的确定    8
2.2.1 RNA的释放    8
2.2.2 RNA的分离与纯化    8
2.2.3 RNA质量与提取步骤的关系    9
2.2.4 RNA的浓缩、沉淀与洗涤    9
3 试验方法与材料    9
3.1 实验材料    9
3.1.1 小鼠品系和饲养条件    9
3.1.2 主要试剂    10
3.1.3 主要仪器    10
3.2 实验方法    10 血液RNA提取条件的优化:http://www.lwfree.cn/yixue/20171204/17343.html
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